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2020年14期
過表達KAR2基因對畢赤酵母產米黑根毛霉脂肪酶的影響
| 作 者 | 黃金金，孫夢雪，王一洲，趙慶伊，張 馨，張愷倪 |
| 第一作者 | 黃金金 |
| 作者單位 | 江蘇師范大學藥用植物生物技術實驗室，生命科學學院，江蘇徐州 |
| 卷 號 | 48 |
| 發表年份 | 2020 |
| 發表刊期 | 14 |
| 發表頁面 | 103-107 |
| 關 鍵 字 | 米黑根毛霉脂肪酶；KAR2；過表達；畢赤酵母；UPR |
| 摘 要 | Kar2p是分子伴侶蛋白，可與新生肽結合，促進新生肽進入內質網。為研究其對米黑根毛霉脂肪酶 (RML) 在畢赤酵母中表達的影響，通過PCR方法從畢赤酵母菌株中克隆到KAR2基因，并用畢赤酵母胞內表達載體pPIC3.5K構建過表達質粒KAR2-pPIC3.5K。用電轉化的方法，將KAR2-pPIC3.5K二次轉化到含4-拷貝rml基因的畢赤酵母重組菌株4pRML-X33中，獲得能同時過表達RML和KAR2p的二次轉化子4pRML-X33-KAR2。搖瓶發酵發現，過表達KAR2基因對菌株生長無明顯影響，但RML胞外酶活降低。采用RT-qPCR方法分析菌中rml及UPR相關基因的轉錄水平，發現KAR2基因轉錄水平上調了3.7倍，雖然僅引起與UPR相關的HAC1基因轉錄水平的下調，但卻使rml的表達下調43%。說明KAR2過表達導致RML產量降低是降低了rml的mRNA量，而不是增加內質網中蛋白折疊的壓力。 |
| 附 件 |
過表達KAR2基因對畢赤酵母產米黑根毛霉脂肪酶的影響
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