作 者 | 楊靈康,陳卓,郭盈希 |
第一作者 | 楊靈康 |
作者單位 | 合肥工業大學食品與生物工程學院,安徽合肥 |
卷 號 | 50 |
發表年份 | 2022 |
發表刊期 | 5 |
發表頁面 | 81-84 |
關 鍵 字 | 肝素;6-O-磺基轉移酶;定點突變;大腸桿菌;蛋白表達 |
摘 要 | 在化學酶法合成肝素過程中,肝素修飾酶6-O-磺基轉移酶(6-OST)在肝素分子中N-乙酰基葡糖胺的C6羥基上進行硫酸化,以達到與肝素相似的硫酸化水平。構建的重組蛋白MBP-6-OST-3的純化結果表明有較多雜蛋白條帶,且蛋白濃度較低。利用定點突變原理設計引物,通過PCR擴增得到突變質粒pMAL-c2X-6-OST-3-linker-His。將突變質粒轉化至大腸桿菌Rosetta-gamiB(DE3),實現了MBP-6-OST-3-His蛋白的表達。利用鎳柱親和層析系統將MBP-6-OST-3-His蛋白純化,并通過SDS-PAGE電泳分析蛋白表達情況。該研究獲得了具有高表達、高純度的MBP-6-OST-3-His蛋白,這為獲得高純度的6-OST-3提供了可靠的方法以及為其應用于化學酶法合成肝素的研究提供了理論基礎。 |
附 件 | 肝素修飾酶6-O-磺基轉移酶的高產量表達 |
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