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2022年07期
菌絲霉素抗菌肽高密度發酵生產及其特性研究
| 作 者 | 宋士良，陸克文 |
| 第一作者 | 宋士良 |
| 作者單位 | 上海邦成生物工程有限公司，上海 |
| 卷 號 | 50 |
| 發表年份 | 2022 |
| 發表刊期 | 7 |
| 發表頁面 | 78-87 |
| 關 鍵 字 | 菌絲霉素抗菌肽；高密度發酵工藝；菌絲霉素含量檢測；產品特性 |
| 摘 要 | ［目的］開發菌絲霉素抗菌肽，以替代抗生素在飼料生產中添加使用。［方法］以高產菌絲霉素畢赤酵母基因工程菌PPle-BC01為供試菌株，在15 L實驗室發酵罐優化發酵工藝的基礎上，通過50 L、5 t、60 t發酵罐高密度發酵工藝進一步優化放大試驗，實現了60 t罐規模的穩定生產。經層析柱分離、純化，得到相對純度≥90%的純品。純品水解后的游離氨基酸樣品，經PITC衍生化處理后，再經過HPLC檢測及氨基酸組成摩爾百分比計算與氨基酸混合標準品比對，分析其氨基酸組成。純品經多肽蛋白質相對分子質量分析測試，測得plectasin單同位素相對分子量。純品經蛋白濃度、抗菌效價測定、比活計算以及產品抗菌效價測定，獲得產品中plectasin含量，同時測試了解其產品特性。［結果］60 t發酵罐穩定3批次試生產發酵液菌體濕重峰值分別為43.34%、43.78%和43.78%，抗菌效價峰值分別為10 566.99、10 986.45和10 788.56 U/mL；噴霧干燥產品收率分別為12.19%、12.30%和12.50%，抗菌效價分別為100 672.10、103 561.20和99 765.50 U/g。3批次試生產產品中plectasin含量分別為2.26%、2.32%和2.24%。純品經檢測符合plectasin由40個氨基酸組成的多肽的理論氨基酸殘基個數值，分子量為4.440 7 kD。產品在95 ℃溫度以下具有良好的熱穩定性；pH 3.0~9.0具有良好的酸堿穩定性；在0.03%~0.30%豬膽鹽濃度具有較好的膽鹽耐受性；對胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K均具有良好的抗降解性。［結論］發酵終產品收率達10%，產品抗菌效價達8萬U/g以上，產品中plectasin含量達2%以上，實現了60 t罐規模的產業化穩定生產。 |
| 附 件 |
菌絲霉素抗菌肽高密度發酵生產及其特性研究
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