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2022年20期
豬瘟病毒實時熒光重組酶聚合酶擴增檢測方法的建立及應用
| 作 者 | 楊俊，聶福平，王昱，史梅梅，謝曉倩，王國民，李賢良，吳蕊，張歡，唐昌杰，李應國 |
| 第一作者 | 楊俊 |
| 作者單位 | 重慶海關技術中心，重慶 |
| 卷 號 | 50 |
| 發表年份 | 2022 |
| 發表刊期 | 20 |
| 發表頁面 | 166-169, 173 |
| 關 鍵 字 | 豬瘟病毒；核酸檢測；等溫擴增；重組酶聚合酶擴增；聚合酶鏈反應 |
| 摘 要 | ［目的］建立豬瘟病毒（CSFV）快速、靈敏的檢測方法。［方法］選擇CSFV基因組中保守的5′端非編碼區（NTR）作為研究對象，根據重組酶聚合酶擴增（RPA）原理，設計特異性RPA引物和exo探針，并對反應溫度和時間進行優化，建立檢測豬瘟病毒的實時熒光RPA方法。［結果］該研究建立的方法能在39 ℃恒溫條件下30 min內得到檢測結果，實現了快速檢測CSFV的目的。該方法僅對CSFV的核酸有擴增反應，而對豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬胸膜肺炎放線桿菌（APP）、副豬嗜血桿菌（HPS）、豬肺炎支原體(Mhp）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環病毒2型（PCV-2）、豬水皰病病毒（SVDV）和豬細小病毒（PPV）8種常見豬病病原的檢測結果均為陰性，表現出良好的特異性，對含有CSFV目的片段的重組質粒的最低檢測限為8.3×102 copies/μL。同時使用新建立的CSFV實時熒光RPA檢測方法和國家標準（GB/T 16551—2020）中的實時熒光RT-PCR對采集自重慶某養豬場的33份臨床樣本進行CSFV核酸檢測，以驗證CSFV的實用性，結果顯示，2種方法檢出的陰、陽性樣本完全一致。［結論］該研究建立的CSFV實時熒光RPA方法反應條件溫和、核酸擴增迅速、檢測結果特異、靈敏，為CSF的診斷提供了新的選擇。 |
| 附 件 |
豬瘟病毒實時熒光重組酶聚合酶擴增檢測方法的建立及應用
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