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2022年20期
犬黑皮質素受體-4突變體D298N真核表達載體的構建及其在MDCK細胞中的表達
| 作 者 | 宋立先，劉春紅， 王占青，高蓉，徐學振 |
| 第一作者 | 宋立先 |
| 作者單位 | 濱州醫學院煙臺附院，山東煙臺 |
| 卷 號 | 50 |
| 發表年份 | 2022 |
| 發表刊期 | 20 |
| 發表頁面 | 76-80 |
| 關 鍵 字 | 犬；黑皮質素受體-4；真核表達載體；定點誘變；D298N；MDCK細胞 |
| 摘 要 | ［目的］引進犬MC4R突變點，構建突變體D298N表達載體并在MDCK細胞中獲得表達。［方法］設計帶突變點D298N引物，以犬MC4R基因組DNA為模板，采用普通PCR和Overlap-PCR擴增編碼區，將產物克隆、酶切、測序鑒定。將測序正確的基因連接到pcDNA3.1-myc-His/A載體上，將重組體pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D298N酶切、鑒定，將測序正確的重組體轉染到MDCK細胞中，繼續培養3 d，提取細胞總RNA，并采用RT-PCR方法檢測基因表達。提取細胞總蛋白，Western Blot鑒定蛋白表達。［結果］構建帶D298N突變點的真核表達載體，提取質粒后有2處堿基不同，分別是777位堿基T→C ，892位堿基G→A（引入的突變位點）。轉染到MDCK后，RT-PCR和Western Blot均檢測到重組體在基因水平和蛋白水平的表達。［結論］成功構建犬的重組體真核表達載體并在MDCK細胞中表達。 |
| 附 件 |
犬黑皮質素受體-4突變體D298N真核表達載體的構建及其在MDCK細胞中的表達
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