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2023年09期
利用CRISPR/Cas9基因編輯技術創建水稻OsPUX2突變體
| 作 者 | 高上，滿淼淼，趙華，張麗娜，王加峰 |
| 第一作者 | 高上 |
| 作者單位 | 華南農業大學國家植物航天育種工程技術研究中心，廣東廣州 |
| 卷 號 | 51 |
| 發表年份 | 2023 |
| 發表刊期 | 9 |
| 發表頁面 | 73-76 |
| 關 鍵 字 | 水稻；U-box；OsPUX2；CRISPR/Cas9；基因編輯 |
| 摘 要 | ［目的］U-box蛋白是一類決定靶標蛋白特異性的E3泛素連接酶（少部分屬于泛素鏈聚集因子-E4），在植物抗病、抗逆和生長發育各階段都發揮著重要作用。為揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反應中的具體生物學功能，利用CRISPR/Cas9編輯技術對OsPUX2基因進行編輯。［方法］在OsPUX2第1外顯子設計1個20 bp的編輯靶點，構建了OsPUX2基因敲除載體pRGEB32-OsPUX2-gRNA載體，并通過農桿菌介導的轉化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈傷組織，經潮霉素檢測獲得轉基因陽性植株，并對T0代轉基因植株進行靶點區域序列進行PCR和測序分析，分析ospux2的突變類型。［結果］成功獲得了ospux2的敲除突變體材料，對突變類型的分析發現，轉基因編輯后代共存在7種突變類型，以缺失突變為主，其中一種純合突變類型在OsPUX2第一個外顯子的第115號堿基處缺失了一個C堿基，導致蛋白的翻譯在第84個氨基酸處提前終止。［結論］該研究獲得ospux2突變株系對進一步研究該基因的功能具有重要意義。 |
| 附 件 |
利用CRISPR/Cas9基因編輯技術創建水稻OsPUX2突變體
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