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2013年31期
Lipocalin核糖體展示文庫的構建及雌二醇特異性模擬抗體的篩選
| 作 者 | 劉建青，寧保安，高志賢 |
| 第一作者 | 劉建青 |
| 作者單位 | 包頭師范學院生物科學與技術學院，內蒙古包頭 |
| 卷 號 | 41 |
| 發表年份 | 2013 |
| 發表刊期 | 31 |
| 發表頁面 | 12251-12254,12261 |
| 關 鍵 字 | 雌二醇；BBP；核糖體展示；突變文庫 |
| 摘 要 |
［目的］構建Lipocalin核糖體展示文庫，并篩選雌二醇特異性模擬抗體。［方法］以Lipocalin蛋白家族中的BBP（膽汁三烯結合蛋白）為模板，設計包含16個隨機突變位點的引物，合成BBP基因文庫；引入核糖體展示所必需的全部組件，采用重疊PCR技術將BBP庫與核糖體展示組件進行拼接，構建核糖體展示Anticalin模擬抗體庫；再將構建的Anticalin文庫進行體外轉錄與翻譯，產生模擬抗體-核糖體-mRNA三聯復合體文庫。以小分子抗原雌二醇為靶標，采用固相親和方法篩選抗雌二醇抗體，通過改變Mg2+濃度將模擬抗體-核糖體-mRNA三聯復合體解離，得到與模擬抗體對應的mRNA，經過RT-PCR得到篩選后的DNA文庫并重新引入核糖體展示元件進行下一輪淘篩。［結果］通過5輪生物淘篩，模擬抗體得到富集，獲得高特異性抗雌二醇抗體。其中有一株克隆的親和力為54 mmol/L (Kon=4.975 6×104 個/M·S；Koff=0.002 7個/S)。IC50與LOD值分別為50和0.071 ng/ml。［結論］獲得的雌二醇模擬抗體可以作為抗體并用于檢測動物體內雌二醇的殘留。 |
| 附 件 |
Lipocalin核糖體展示文庫的構建及雌二醇特異性模擬抗體的篩選
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