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2020年05期
產物可直接進行“TA”克隆的高保真PCR法
| 作 者 | 孫達權，張欽真，胡桐，湛釗，石松，薛殿婷 |
| 第一作者 | 孫達權 |
| 作者單位 | 貴州醫科大學基礎醫學院， 貴州貴陽 |
| 卷 號 | 48 |
| 發表年份 | 2020 |
| 發表刊期 | 5 |
| 發表頁面 | 109-111，116 |
| 關 鍵 字 | 聚合酶鏈式反應；DNA聚合酶；“TA”克隆；DNA突變 |
| 摘 要 | ［目的］介紹一種PCR產物直接進行“TA”克隆的高保真PCR法，減少高保真PCR產物“TA”克隆的中間步驟。［方法］Trizol法提取人肝癌細胞SMMC-7721總RNA，并將mRNA反轉錄成cDNA。以cDNA為模板，聯合不同特性的Taq DNA聚合酶擴增PKC基因的蛋白編碼區。PCR產物經純化后進行“TA”克隆、細菌轉化、篩選培養、質粒抽提、酶切鑒定和測序鑒定等。［結果］高保真DNA聚合酶擴增的PCR產物未發現DNA突變，但不能直接進行“TA”克隆。Taq DNA聚合酶擴增的產物可直接進行“TA”克隆，但其內部存在多個突變位點，保真性明顯不足。聯合使用高保真DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶（雙酶聯用）擴增的PCR產物可直接進行“TA”克隆，且DNA測序未發現突變。［結論］雙酶聯用PCR可以獲得高保真PCR產物，并直接進行“TA”克隆。 |
| 附 件 |
產物可直接進行“TA”克隆的高保真PCR法
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