作 者 | 李然,田兆豐,張飛云 |
第一作者 | 李然 |
作者單位 | 首都師范大學生命科學學院,北京 |
卷 號 | 42 |
發表年份 | 2014 |
發表刊期 | 1 |
發表頁面 | 20-23 |
關 鍵 字 | 擬南芥;fibrillarin蛋白;ak6 |
摘 要 |
[目的]研究擬南芥中Fibrillarin基因的克隆、表達及純化,并探索其與ak6蛋白的相互作用。[方法]利用pGEX6P1與Fibrillarin基因構建重組表達質粒,將重組質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導表達,運用同樣方法構建PET28aak6原核表達質粒,獲得Hisak6融合蛋白,并運用體外pull down技術驗證二者的相互作用。[結果]在溫度為37 ℃、誘導時間為16~20 h、IPTG濃度為0.5 mmol/L時,fibrillarin蛋白的純化濃度最高。試驗成功獲得了符合標準的RNA,并獲得了與預期片段大小相符的清晰的目的條帶;pulldown試驗結果表明,擬南芥中fibrillarin蛋白與ak6蛋白具有相互作用。[結論]擬南芥ak6突變體植株可能由于ak6的缺失影響了rRNA前體的加工,從而抑制核糖體的合成,進而阻礙擬南芥莖的生長,使植株表現明顯的矮小癥狀。 |
附 件 | 擬南芥中Fibrillarin基因的克隆·表達·純化及與ak6蛋白相互作用研究 |
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