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2014年12期
玉米和擬南芥的原生質體制備及瞬時表達體系的研究
| 作 者 | 趙蘇州，盧運明，張占路，趙楊敏，王磊 |
| 第一作者 | 趙蘇州 |
| 作者單位 | 西南科技大學生命科學與工程學院，四川綿陽 |
| 卷 號 | 42 |
| 發表年份 | 2014 |
| 發表刊期 | 12 |
| 發表頁面 | 3479-3482 |
| 關 鍵 字 | 玉米；原生質體; 擬南芥 |
| 摘 要 |
［目的］優化玉米和擬南芥原生質體的制備條件及瞬時表達體系。［方法］以不同時期玉米葉片和擬南芥為材料分離原生質體，通過對不同酶濃度，解離時間和滲透壓的研究，優化最佳分離原生質體體系；原生質體再經PEG介導的轉化，通過GFP基因表達百分比鑒定原生質體活性和轉化效率。［結果］玉米和擬南芥原生質分離的最佳條件為：纖維素酶1.5%, 離析酶0.5%；擬南芥酶解4 h，甘露醇濃度0.4 mol/L；玉米酶解6 h，甘露醇濃度0.45~0.50 mol/L。最佳生長時期為：擬南芥6~8片葉；玉米二片葉。用去內毒素質粒經PEG(玉米30% PEG，擬南芥40% PEG)誘導轉化置于黑暗下培養，原生質體活性和轉化效率較高，原生質體中可以觀察到明顯的GFP熒光。［結論］玉米和擬南芥原生質體的制備受酶濃度，解離時間和滲透壓的影響，在原生質體轉化過程中，質粒DNA純度，PEG濃度等是影響轉化效率的關鍵因素，與擬南芥原生質體相比玉米原生質體要穩定性差一些。 |
| 附 件 |
玉米和擬南芥的原生質體制備及瞬時表達體系的研究
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