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2014年12期
水稻HLCMS細胞質雄性不育基因的體外轉錄及Northern Blot檢測
| 作 者 | 華宇峰，劉京，王春臺，劉學群，譚艷平 |
| 第一作者 | 華宇峰 |
| 作者單位 | 中南民族大學生命科學學院，湖北武漢 |
| 卷 號 | 42 |
| 發表年份 | 2014 |
| 發表刊期 | 12 |
| 發表頁面 | 3497-3498，3501 |
| 關 鍵 字 | 水稻；紅蓮型細胞質雄性不育；體外轉錄；Northern Blot |
| 摘 要 |
［目的］通過基因克隆和體外轉錄技術獲得水稻紅蓮型細胞質雄性不育(HLCMS)不育系粵泰A(YTA)中的2個細胞質雄性不育基因orf216和orfH79的RNA，為Northern Blot檢測提供陽性定量標準品，并可作為凝膠阻滯試驗的底物，用于研究與恢復基因編碼產物的相互作用，從而為闡釋不育基因與恢復基因的相互作用分子機制奠定基礎。［方法］以紅蓮型胞質雄性不育基因orf216和orfH79的特異引物，利用不育系YTA為材料，PCR擴增獲得相應片段，分別連接至pGEM-T Easy質粒并篩選陽性重組質粒，測序鑒定后酶切線性化，補平粘性末端，以rN4為底物、用依賴于DNA的 RNA聚合酶進行體外轉錄，轉錄產物用DNase處理除去DNA模板，純化并測定RNA濃度，并用Northern Blot 驗證。［結果］獲得了細胞質雄性不育基因orf216和orfH79各自的RNA，經檢測orf216濃度為1.286 μg/μl，A260/A280為2.01；orfH79濃度為1.006 μg/μl，A260/A280為2.10。［結論］運用體外轉錄技術獲得的RNA片段條帶單一，純度較高，可用于體外大量獲取目的RNA。 |
| 附 件 |
水稻HLCMS細胞質雄性不育基因的體外轉錄及Northern Blot檢測
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