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2016年15期
斑馬魚性腺組織的原代細胞培養技術的建立
| 作 者 | 董丹丹，孫燕俠，郭華榮 |
| 第一作者 | 董丹丹 |
| 作者單位 | 中國海洋大學海洋生命學院，山東青島 |
| 卷 號 | 44 |
| 發表年份 | 2016 |
| 發表刊期 | 15 |
| 發表頁面 | 130-134 |
| 關 鍵 字 | 斑馬魚；性腺組織；原代細胞培養；傳代培養, |
| 摘 要 | ［目的］建立斑馬魚卵巢和精巢組織的原代細胞培養技術，獲得原代和傳代培養細胞單層。［方法］采用組織塊貼壁法進行斑馬魚卵巢和精巢組織的原代細胞培養，采用0.25%胰蛋白酶消化法進行傳代培養。［結果］斑馬魚性腺組織的原代細胞培養條件為：最適培養基為DMEM/F12（pH 7.0~7.2)，培養溫度為24 ℃，在添加20 ng/mL 表皮生長因子（EGF）、20 ng/mL 堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）、0.5 mmol/L β-巰基乙醇和15%胎牛血清時更有利于細胞的存活。其中，卵巢的組織塊接種3~4 d后，上皮樣細胞首先開始遷出，遷出的上皮樣細胞生長5 d后，逐漸凋亡；此后，成纖維樣細胞和另一種上皮樣細胞開始大量遷出， 10 d后可生長匯合成80%的原代細胞單層；可成功傳代培養1次，但傳代后的上皮樣細胞不貼壁，很快死亡,而傳代后的成纖維樣細胞可貼壁生長，但基本不分裂，健康存活7 d后開始逐漸凋亡。精巢組織接種5 d后，上皮樣細胞和成纖維樣細胞同時開始遷出，培養16 d后逐漸凋亡，僅得到60%原代培養細胞單層。［結論］初步建立了斑馬魚性腺組織的原代細胞培養條件，并將卵巢組織塊遷出的成纖維樣細胞成功傳代1次。 |
| 附 件 |
斑馬魚性腺組織的原代細胞培養技術的建立
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