2016年33期

山楂PCR-SSCP反應體系與反應條件的優化

作  者 撒云俐,那冬晨
第一作者 撒云俐
作者單位 山西師范大學生命科學學院,山西臨汾
卷  號 44
發表年份 2016
發表刊期 33
發表頁面 137-139,142
關  鍵  字 山楂;PCR-SSCP;引物;反應體系;反應條件,
摘  要 [目的]優化山楂PCR-SSCP反應體系與反應條件。[方法]以山楂為材料,采用改良的CTAB法分步提取葉綠體DNA和核DNA,對PCR-SSCP引物進行篩選,同時進行PCR-SSCP反應體系和反應條件的優化,瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物,非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測變性后的PCR擴增產物。[結果] ropB、ropL、rpoC1、ITS2、psbA-trnH 5對引物適用于山楂PCR-SSCP分析。電泳時,采用6%聚丙烯酰胺凝膠(交聯度29∶1),4 ℃恒溫,200 V恒壓,上樣緩沖液(不含甘油)與PCR產物等量混合,98 ℃堿(1%NaOH)變性15 min,電泳緩沖液為0.5×TBE,電泳3~4 h可得到較好的山楂PCR-SSCP電泳圖譜。[結論]建立了山楂PCR-SSCP最優反應體系與反應條件,為山楂SSCP分析奠定基礎。
附  件 山楂PCR-SSCP反應體系與反應條件的優化
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